一、實驗目的要求
1、進一步加強學習、掌握玻璃瓶、試劑瓶的清洗、烘干、包扎的包扎技術。
2、為下一次的玻璃瓶、試劑瓶_的準備工作。
二、原理
為確保實驗順利地進行,要求把實驗所用的玻璃瓶清洗干凈。為保持_后和無菌狀態(tài),需要對培養(yǎng)皿、吸管等進行包扎,對試管和三角瓶等加塞棉塞。這些工作看起來很普通簡單,但如操作不當或不安操作規(guī)定去做,則會影響實驗結果,甚至會導致試驗的失敗。
_原理:高壓蒸汽_是將待_的物品放在一個密閉的加壓_鍋內,通過加熱,使_鍋隔套間的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡,然后關閉排氣閥,繼續(xù)加熱,此時由于蒸汽不能溢出,而增加了_器內的壓力,從而使沸點增高,得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到_的目的。適用于一般培養(yǎng)基、玻璃瓶、試劑瓶、無菌水、金屬用具。一般培養(yǎng)基在121.3℃_20分鐘即可。干熱_是利用高溫使微生物細胞內的蛋白質凝固變性而達到_的目的。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關,在菌體受熱時,當環(huán)境和細胞內含水量越大,則蛋白質凝固_越快,反之含水量越小,凝固緩慢。因此,與濕熱_相比,干熱_所需溫度高(160—170℃),時間長(1—2小時)。但干熱_溫度不能_180℃,否則,包器皿的紙或棉塞_會烤焦,甚至引起燃燒,因而一般塑料制品不能用干熱_。
三、試劑瓶和儀器
(一)儀器
高壓蒸汽_鍋、電熱烘箱、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿和吸管、棉線、紗布、棉花、牛皮紙、報紙、硅膠塞等
四、實驗內容
(一)玻璃瓶、試劑瓶的清洗:
新購的玻璃器皿的洗滌
將器皿放入2%鹽酸溶液中浸泡數小時,以除去游離的堿性物質,_后用流水沖凈。
對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸,數分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上晾干,即可使用。
常用舊玻璃器皿的洗滌
確實無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用前后,可按常規(guī)用洗衣粉水進行刷洗;
吸取過化學試劑的吸管,先浸泡于清水中,待到_數量后再集中進行清洗。
帶菌玻璃器皿的洗滌
凡實驗室用過的菌種以及帶有活菌的各種玻璃器皿,_經過高溫_或消毒后才能進行刷洗:
1、帶菌培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等物品,做完實驗后放入消毒桶內,用0.1MPa_20~30min后再刷洗。含菌培養(yǎng)皿的_,底蓋要分開放入不同的桶中,再進行高壓_。
2、帶菌的吸管、滴管,使用后不得放在桌子上,立即分別放入盛有3~5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸(筒)內消毒24h后,再經0.1MPa_20min后,取出沖洗。
3、帶菌載玻片及蓋玻片,使用后不得放在桌子上,立即分別放入盛有3~5%來蘇爾或5%石炭酸或0.25%新潔爾滅溶液的玻璃缸(筒)內消毒24h后,用夾子取出經清水沖干凈。
如用于細菌染色的載玻片,要放入50g/L肥皂水中煮沸10min,然后用肥皂水洗,再用清水洗干凈。
_后將載玻片浸入95%酒精中片刻,取出用軟布擦干,或晾干,保存?zhèn)溆谩?br />
若用皂液不能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。
4、含油脂帶菌器材的清洗
單獨高壓_:用0.1MPa_20~30min→趁熱倒去污物→倒放在鋪有吸水紙的籃子上→用100℃烘烤0.5h→用5%的碳酸氫鈉水煮兩次→再用肥皂水刷洗干凈。
?。ǘ?、玻璃瓶、試劑瓶的晾干或烘干
不急用的玻璃瓶:可放在實驗室中自然晾干;
急用的玻璃器瓶:把器材放在托盤中(大件的器材可直接放入烘箱中),再放入烘箱內,用80~120℃烘干,當溫度下降到60℃以下再打開取出器材使用。
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要_后的玻璃瓶仍保持無菌狀態(tài),需在_前進行包扎。
?。?)培養(yǎng)皿:洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套(或根據需要而定)疊在一起,用牢固的紙卷成一筒,或裝入特制的鐵桶中,然后進行_。
(2)吸管:洗凈、烘干后的吸管,在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花,以防在使用時造成污染。塞入的棉花量要適宜,多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一條寬約4~5cm的紙條,以30~50℃的角度螺旋形卷起來,吸管的_在頭部,另一端用剩余的紙條打成一結,以防散開,標上容量,若干支吸管包扎成一束進行_。使用時,從吸管中間擰斷紙條,抽出試管。
?。?)試管和三角瓶:試管和三角瓶都需要做合適的棉塞,棉塞可起過濾作用,避免空氣中的微生物進入容器。制作棉塞時,要求棉花緊貼玻璃壁,沒有皺紋和縫隙,松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入;過松易掉落和污染。棉塞的長度不小于管口直徑的2倍,約2/3塞進管口。
目前,國內已開始采用塑料試管塞,可根據所用的試管的規(guī)格和試驗要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。
若干支試管用繩扎在一起,在棉花部分外包裹油紙或牛皮紙,再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個用油紙包扎。
(四)、玻璃瓶、試劑瓶的_
_:干熱_:160~165℃烘箱中_2h;或濕熱_:121℃20~30min
u干熱_法
1、將包扎好的玻璃瓶擺入電熱烘箱中,相互間要留有_的空隙,以便空氣流通。
2、關緊箱門,打開排氣孔,接上電源。
3、待箱內空氣排出到_程度時,關閉上排氣孔,加熱至_溫度后,固定溫度進行_:160℃—165℃保持2小時。2小時后切斷電源。
4、待烘箱內溫度自然降溫冷卻到60℃以下后,再開門取出玻璃器皿,避免由于溫度突然下降而引起玻璃瓶碎裂。
高壓蒸汽_法
1、關好排水閥門,放入純凈水或蒸餾水至標度。注意水量_要加足,否則容易造成事故。
2、將須要_的玻璃瓶、培養(yǎng)基等裝入_鍋中,加蓋密封。旋緊螺旋時,先將每個螺旋旋轉到_程度(不要太緊),然后再旋緊相對的兩個螺旋,以達到平衡旋緊,否則易造成漏氣,達不到__的目的。
3、通電加溫,打開排氣活門,排盡鍋內的空氣。通常當壓力表指針升至5磅或0.05MPa時,打開排氣活門放氣,待壓力表指針降至零點一小段時間后,再關閉活門。即活門沖出的全部是蒸汽時則表示_,此時可關閉排氣活門,如果過早關閉活門,排氣不_,也達不到__的目的。
4、恒溫_:0.1MPa或15磅壓力保持20~30分鐘。壓力表的指針上升時,鍋內溫度也逐漸升高,當壓力表指針升至0.1MPa時或15磅時,鍋內溫度相當于120℃~121℃(等于一個大氣壓),此時開始計算_時間,控制熱源,使處于0.1MPa或15磅壓力保持20~30分鐘,即能達到__的目的,然后停止加溫。當達到所需溫度時開始計時,并在此溫度下保持所需的時間。
5、降溫:自然降溫或打開活門排汽降溫。稍微打開一點排氣活門,使鍋內蒸汽緩慢排除,然后逐漸開大活門,氣壓徐徐下降,注意勿使排氣過快,否則會使鍋內的培養(yǎng)基沸騰而沖脫或沾染棉花塞,但排氣太慢又使玻璃瓶在鍋內,受高溫處理時間過長,對玻璃瓶也是不利的。一般從排氣到打開鍋蓋以10分鐘左右為好。
6、當鍋內蒸汽_排盡時即壓力表指針降到零時,要立即打開鍋蓋。
7、取出玻璃瓶:當鍋內溫度下降到60℃左右時器材或培養(yǎng)基。如玻璃瓶需制備固體斜面培養(yǎng)基時,則應趁熱將試管斜放在桌上,上面蓋上報紙以免落灰塵,冷卻后便可收起。
8、_后將高壓_器內的剩余水排出。
9、觀察_效果。把_玻璃瓶入25℃溫箱中,培養(yǎng)48小時觀察_效果。48小時后不見雜菌生出,便證明玻璃瓶已達到_目的,可以使用。
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